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猪粪发酵过程中微生物数量的变化 熊世娟，徐卫红，杨玉，等。2014.不同温度下微生物和纤维素酶对猪粪理化特性的影响[j]科学期刊，34（12）：3158-3165。 Xiong S J, Xu W H, Yang Y, et al.2014.Effects of microbes and cellulase in pig manure fermentation at different temperature[J].Acta Scientiae Circumstantiae, 34 (12) :3158-3165 1 畜禽粪发酵工艺 近年来, 我国畜禽养殖场的集约化、规模化、商品化发展产生了大量畜禽排泄物和废弃物.畜禽粪便中含有大量病原微生物和各种寄生虫卵, 如不及时加以处理和合理利用, 将造成严重的有机污染和生物污染, 危害人畜的健康.2010年, 我国平均每公顷耕地的畜禽粪便污染量为1.86 t, 畜禽粪便已成为当前我国农业面源污染的最主要污染源之一 (仇焕广等, 2013.) , 减少畜禽粪便的污染并进行资源化利用已成为十分紧迫的任务.将畜禽粪便发酵腐熟不仅减少环境污染, 且腐熟后的粪便可作为优质的有机肥资源.畜禽粪便发酵的实质是有机物质在微生物的作用下进行矿质化和腐殖化, 同时利用产生的生物热杀灭粪便中的病原物而达到无害化目的 (夏炜林等, 2007) .因此, 微生物对畜禽粪便发酵至关重要.然而, 传统的畜禽粪便发酵方法劳动强度大, 生产周期长而肥效低, 规模化生产极受限制.近年来, 国内外对接种微生物的筛选及其对畜禽粪便发酵的影响方面做了大量研究 (陈昭辉, 2006;冯致等, 2013;何志刚, 2007;霍培书等, 2013;李杰等, 2014;刘克锋等, 2003;Sasaki et al., 2006;孙晓华等, 2004;Wakase et al., 2008;王伟东等, 2008;王宇, 2008;赵明梅等, 2007) .接种微生物发酵剂可以改善畜禽发酵粪便的理化性状, 减少臭味, 促进畜禽粪便发酵快速腐熟, 极大弥补了畜禽粪便传统发酵的不足 (冯致等, 2013;霍培书等, 2013;李杰等, 2014;Sasaki et al., 2006;Wakase et al., 2008;王宇, 2008;赵明梅等, 2007) . 温度是影响堆肥反应速率的决定性因素, 它可制约微生物的活性及有机物的降解速度, 从而影响堆肥进程.研究显示 (Avnimelech et al., 2004;Bach et al., 1984;李国学, 2003) , 温度过高或过低都会降低微生物的活性而影响有机质的降解效果, 不利于堆肥的腐熟.目前, 粪便发酵相关研究大多集中在微生物菌剂对堆肥发酵结果的影响, 而对不同温度下接种不同发酵剂组合及其混合比例对畜禽粪便发酵过程中基本理化指标的变化方面研究甚少.为此, 本研究采用室内气候培养箱, 分别于5℃和25℃两个温度条件下, 研究了枯草芽孢杆菌、EM菌和纤维素酶3种发酵剂及其组合对猪粪发酵过程中p H值、铵态氮、有机质、全氮、C/N、微生物数量的变化特征的影响, 旨在为筛选不同温度下猪粪发酵最佳微生物种类及组合提供科学依据. 2 材料和方法表面活性剂 2.1 枯草芽孢杆菌及em菌的制备 供试猪粪采自重庆市北碚区, 采样时间是2013年3月1日.采来的猪粪用塑料袋装好, 放于-20℃的冰箱中冷冻保存备用.供试猪粪基本理化性质为:有机质80.1%、全氮3.65%、全磷1.36%、全钾0.45%、C/N 13.27、含水量75%、p H 7.41. 实验用枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 购买自南京便诊生物科技有限公司, 配制成菌液浓度约7.2×106个·m L-1;EM菌, 购买自河南中广集团天义生物谷, 配制成菌液浓度约100亿·m L-1;纤维素酶规格为40 U·mg-1, 购买自上海如吉生物科技发展有限公司. 2.2 猪粪铵态氮的制备 将采来的猪粪调节水分含量至65%~70%, 分装于玻璃发酵罐中 (发酵罐高度121 mm, 罐身直径72.1 mm, 罐口内径52.6 mm, 公称容量380 m L) , 5℃每个发酵罐装样110 g, 25℃装样40 g.用封口膜封口 (可透气) , 于115℃灭菌15 min, 自然冷却.向灭菌后的猪粪中添加EM菌 (E) 、枯草芽孢杆菌 (K) 、纤维素酶 (X) 及其组合, 对照为不添加菌剂.枯草芽孢杆菌和EM菌的接种量均设为0.2%, 纤维素酶的添加浓度为30 U·g-1, 8个处理 (表1) , 3个重复, 分别置于 (5±1) ℃和 (25±1) ℃的气候培养箱中进行恒温培养, 控制气候培养箱湿度为60