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气相色谱质谱联用技术在松茸中的应用 松口蘑是一种非太子菌属的共生菌，也是松菌属的一种共生菌。它具有强身、理气、止痛、益胃、治疗糖尿病和肿瘤等功效。在我国主要分布在吉林延边、云南、四川、西藏。松茸香气浓郁、菌肉肥厚、味道鲜美、富含蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素,具有极高的营养价值和药用价值。尤以长白山区的松茸品质上好,被誉为“菌中之王”。近年来国内外对松茸的研究大都局限在驯养、粗加工方面的研究,对长白山区松茸脂肪酸的研究报道较少。本文对松茸脂肪酸进行气相色谱/质谱法(GC/MS)分析,并用脂肪酸甲酯的裂解规律和质谱特征进行了分析归纳,为进一步揭示其药用价值,更好地开发和利用该植物资源提供科学依据。 1 实验部分 1.1 索氏提取器 PE Clarus600型气相色谱质谱联用仪;索氏提取器;石油醚、氢氧化钠、甲醇、正己烷:美国天地公司,优级纯;松茸:吉林延边,经延边大学农学院李官浩博士鉴定为口蘑科口蘑属松茸。 1.2 索氏提取液制备 取松茸粉末5.00 g,精密称定,置索氏提取器中,加100 m L石油醚,回流提取6 h。减压回收石油醚,得到总脂,精密称取为8.5 mg。 1.3 gc/ms分析 取一定量的总脂放入10 m L比色管中,加1 m L乙醚/正己烷(2:1)浸泡30 min,依次加入1 m L甲醇、1 m L 0.8 mol/L KOH-甲醇,摇匀,静止5 min,取上清液供GC/MS分析。 1.4 脂肪酸的gc-ms分析 1.4.1 程序升温试验 色谱柱:Elites-5ms(30 m×0.25mm,0.25μm film)。采用程序升温,柱温140℃(保持5 min),以4℃/min升温至240℃。进样口温度260℃,进样量1μL,分流比25:1,线速度20 cm/s,载气为高纯氦气。 1.4.2 扫描质量范围 GC/MS接口温度280℃,电子轰击(EI)离子源,电离能量70 e V,离子源温度200℃,溶剂延迟3 min,扫描质量范围为m/z40~500。光电倍增器电压为500 V。 2 结果与讨论 2.1 脂肪酸与甲醇的质量分析 2.1.1 饱和脂肪酸甲酯基峰离子的合成 饱和脂肪酸甲酯通过麦氏重排和断裂,得到碎片离[CH3OC(OH)=CH2]+(m/z74),此离子为饱和脂肪酸甲酯的基峰离子;C-C键断裂失去烃基C3H7,得到[M-43]+离子;同时甲酯酰氧键经断裂,得到[M-31]+离子;由此可以得到饱和脂肪酸甲酯的特征离子:m/z74,[M-43]+,[M-31]+及分子离子M+。 以16碳酸(C16:0)甲酯为例,其质谱图见图1。 2.1.2 单不饱和脂肪酸的质量分析 2.1.3 多酚脂肪酸的质量分析 2.2 松茸的脂肪酸 松茸脂肪酸成分的GC/MS总离子流色谱图见图4。对总离子流图中各峰经质谱扫描后得到质谱图,通过NIST标准质谱图库进行检索,与文献的质谱数据对照,确认各化合物,按面积归一化法进行定量,结果见表1。 从松茸的G C/M S图中共鉴定出脂肪酸9种,其中主要的脂肪酸为亚油酸(43.4%)、油酸(34.2%)、共轭亚油酸(8.17%),这3种脂肪酸占总脂肪酸的82.6%;其中共轭亚油酸为初次报导。本文将松茸中脂肪酸的含量与其他几种常用的食用菌作比较(表2)。几种食用菌脂肪酸中不饱和脂肪酸的含量都在80%以下,只有松茸中含有不饱和脂肪酸在80%以上,且含共轭亚油酸量达到8.17%。 3 松茸的主要化学成分 利用KOH-甲醇作为衍生试剂,通过对衍生化和色谱分离条件的优化,建立了气相色谱/质谱定性、定量长白山脉松茸中脂肪酸的方法。该方法重现性好、灵敏度高、操作简便;测定结果表明,长白山脉松茸富含不饱和脂肪酸,这与文献报道的不饱和脂肪酸在食用真菌脂肪酸中占绝对优势的结论一致。其中油酸、亚油酸和共轭亚油酸的含量占脂肪酸的86.2%,而肉豆蔻酸、棕榈油酸、硬脂酸的含量非常低。油酸、亚油酸等可有效地清除人体血液中的垃圾,降低胆固醇的含量和血液黏稠度,预防高血压,脑血栓等心脑血管系统疾病的作用。本研究结果将为松茸的药用、食用等方面的进一步开发利用提供科学依据。 单不饱和脂肪酸甲酯通过双键迁移和断裂产生碎片离子C4H7+(m/z 55),此离子为单不饱和脂肪酸甲酯的基峰离子;经氢转移和诱导断裂,产生[M-32]+离子;并通过麦氏重排和断裂,得到碎片离子m/z 74和[M-74]+离子,由此可以得到单不饱和脂肪酸甲酯的特征离子:m/z 55,[M-74]+,[M-32]+及分子离子M+。以9-十八碳酸(C18:1)甲酯为例,其质谱图见图2,特征离子为:m/z 55、222、264、296。 多不饱和脂肪酸甲酯通过双键迁移和断裂产生环状离子C5H7+(m/z 67),同时甲酯酰氧键经断裂,得到[M-3