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201l食品安全技术与标准国际研讨会暨AOAC中国区会议论文集
入l也滴稀盐酸)分别配制成100
SeEt
100甥几的混合标准工作液。
1．2仪器条件
mmx4．6mill，5
1．2．1色谱条件HamiltonPI冲X．100色谱柱(250 mmol／L柠檬酸溶
Inn)；流动相为5
4．5，20％氨水调节)，流速1．2mL／min，进样量100止。
液(pH
1．2．2
ICP．MS参数功率：1400W；冷却气流速：14．0L／rain；辅助气流速：0．8L／rain；雾化气流速：0．85
L／rain；H2／He混合气流速：5．8mL／min；H2／He混合气比例：3：97。
1．3样品前处理
1．3．1酸提取样品购自市内超市，猪肉洗净后取精肉部分粉碎，鲜蘑菇洗净后直接粉碎。称取1．09匀
000
质样品，加入5mmol／L的柠檬酸溶液20mL，70℃恒温水浴振荡过夜，3
r／min离心，过0．45岬滤膜，待
测。同样方法做试剂空白。
1．3．2酶水解提取同上将样品粉碎后，称取1．0 mL水，37℃
g匀质样品，加入20mg蛋白酶K，再加入20
水浴振荡4h，3000
r／min离心，过0．45“m滤膜，待测。同样方法做试剂空白。
2结果与讨论
2．1流动相的选择
在硒的形态分析中常用到三氟乙酸、五氟丙酸和七氟丁酸等全氟羧酸【玉¨l，或者添加烷基磺酸钠、氢氧
化四甲基铵等离子对试剂作为流动相成分161，也有加入少量甲醇等有机溶剂来提高有机硒的分离效果…J。考
虑到应尽量采用简单和无毒试剂作为流动相，并结合各种硒形态在水溶液中的离子化状态，本实验选择了乙
酸铵、磷酸二氢铵、柠檬酸等弱酸盐溶液作为流动相进行分离。实验发现使用乙酸铵溶液无法将几种形态硒
进行良好分离，5种硒形态只检测到3个色谱峰；使用磷酸二氢铵溶液作为流动相，5种硒形态可完全分离，
但SeVI出峰时间在35
rain左右，且硒代蛋氨酸的响应信号很低(与文献[3】的报道相符)。为了提高检测效率，
缩短出峰时间，我们试验了改变磷酸二氢铵溶液的浓度和酸度，两种无机硒的保留时间变化很大，甚至与硒
代氨基酸的峰发生重叠，但是在优化的分离条件下，不仅硒代蛋氨酸的检出限没有降低，而且重复性较差，
因此磷酸二氢铵溶液不是理想的流动相。使用柠檬酸溶液作为流动相，在优化的条件下，SeVI出峰时间在lO
rain左右，SeEt出峰时间不变，基本维持在18min左右，5种硒形态在21rain内即可完全分离，重复性和线性
相关系数都很好。因此，本实验选择使用柠檬酸溶液作为流动相进行分离。
2。1．1流动相浓度的影响
随着流动相浓度的升高，SeVI的保留时间缩短，当流动相浓度达到15
mmol／L，
基本重叠；而流动相浓度为5mmol／L时，分离效果令人满意(见图1)。因此本实验选择流动相浓度为5
5种形态硒可在21min内良好分离。
—●一SeCys2
-×-ScI、，
—▲一SeMet
—*卜ScⅥ
-4b-S出
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