补肾明目口服液联合糖皮质激素体外对慢性葡萄膜炎患者外周血淋巴细胞凋亡率及Fas和FasL表达影响.docx

成都中医药大学硕士学位论文附件 2：申明本人承诺：硕士学位论文《补肾明目口服液联合糖皮质激素体外对慢性葡萄膜炎患者外周血淋巴细胞凋亡率及 Fas和 FasL表达的影响》是本人在成都中医药大学攻读硕士学位期间在导师指导下独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。该论文著作权及涉及的有关知识产权归成都中医药大学所有，有关该学位论文成果的开发、转让、论文发表等，均需征得导师和成都中医药大学同意。本人同意：成都中医药大学有权通过影印、复印等手段汇编学位论文予以保存，并提供查阅和借阅；有权按照规定向国家有关部门、机构送交论文及电子版，公布（或刊登）论文内容。(注：论文涉及保密部分请事先做好处理)硕士生签名：导师签名：年月日　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　54成都中医药大学硕士学位论文１　引言　葡萄膜炎是一类常见的眼病，由于其主要影响青壮年，治疗棘手，易于反复发作，治疗不及时或处理不当容易致盲，因此受到全球眼科学界的重视　。迄今研究表明，葡萄膜炎的病因和类型有１００余种［１］，是眼科疾病中最为复杂的疾病之一。根据我国最近大宗病例的分析，特发性葡萄膜炎、Ｖｏｇｔ一小柳原田病、Ｂｅｈｃｅｔ病是最常见的葡萄膜炎类型，就解剖位置而言，前葡萄膜炎最为常见，其次为全葡萄膜炎　［２］　。　治疗上临床常采用皮质类固醇药物治疗，虽能取得一定疗效，但存在停药后激素“反跳”致疾病反复发作特点，长期应用会产生较明显的副作用，如激素性青光眼、白内障，低血钾症，以及升高血压、血糖等　［３］　。　葡萄膜炎的发病机制虽然复杂，但除感染性葡萄膜炎外，其余绝大多数是由自身免疫应答所致。研究发现［４－６］患者淋巴细胞对凋亡有很大抵抗性，造成了自身免疫性淋巴细胞长期存在，导致了葡萄膜炎的慢性化或复发。近年的研究表明，　Ｔ淋巴细胞凋亡相关基因蛋白Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统介导的凋亡参与免疫反应过程中淋巴细胞的调控。Ｆａｓ　是一种具有重要功能的跨膜糖蛋白，为肿瘤坏死因子受体超家族的成员之一，其自然配体为ＦａｓＬ　（　ＦａｓＬｉｇａｎｄ）　。Ｆａｓ　与ＦａｓＬ　或Ｆａｓ　单克隆抗体结合可诱导Ｆａｓ　＋　细胞的凋亡。Ｆａｓ　系统诱导的细胞凋亡可消除自身反应性淋巴细胞，诱导活化Ｔ、Ｂ　细胞凋亡。自身免疫性淋巴细胞对Ｆａｓ／　ＦａｓＬ　系统诱导的凋亡有较大抵抗性，这可能是葡萄膜炎慢性化和复发的重要机制之一。有研究表明，Ｆａｓ／ＦａｓＬ　诱导的淋巴细胞凋亡与细胞的活化状态有关，　经抗原活化的Ｔ淋巴细胞对Ｆａｓ／ＦａｓＬ　诱导的凋亡更敏感。　　　祖国医学认为，虹膜睫状体在脏属肝，易成阳热之变，热气怫郁，肝火炽盛则羞明流泪、抱轮红赤；黄仁受灼、司瞳神展缩之筋肉失灵，则瞳神紧小；肾虚精亏，火盛水衰，则瞳神干缺；肾藏精，精血亏虚，血不养水，水不养膏，膏不能养护瞳神，则见视物不明，神膏混浊，眼前黑花飞舞。因而肾虚肝热、虚火上炎是葡萄膜炎发病的主要病机。所以葡萄膜炎的治疗当标本兼治、补虚泻实，宜首选滋肾清肝法。本课题主要从细胞分子学的角度，初步探索补肾明目口服液联合糖皮质激素对淋巴细胞凋亡及凋亡相关分子的影响。　血清药理学方法，是将中药或复方经口给动物灌服一定时间后，采集动物血液，分离血清，用含药物成分的血清进行体外实验。这一方法不仅反映了药物7成都中医药大学硕士学位论文中可吸收部位的直接作用，而且能反映药物成分在机体作用下所形成的代谢产物和药物诱生的机体内源性物质的间接效应，这些体内作用过程都能够被含药血清真实地反映出来。该法最大优点是用体外实验体系再现药物的体内作用，　实验结果与在体内实验结果一致性好，　它不仅能反应药物中可吸收部分的直接作用，　而且能反应药物成分在机体作用下形成的代谢产物和药物诱生的机体内源性物质的间接效果［７］。可以较为清楚地认识复方药物中主要药物的有效成分及活性部位，　为药物的进一步开发提供依据，　对含药血清的成分进行药效、药动学研究并与原复方粗提物进行比较，　可以发现中药复方发挥药效作用的物质基础，　为探讨中药复方作用规律提供思路［８］。　２　实验材料　２．１　实验中的主要试剂　ＲＰＭＩ１６４０培养液（含Ｌ－谷氨酰）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司　胎牛血清　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　武汉三利　ＦＩＴＣ－ＣＤ９５单克隆抗体　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　美国ｂｉｏｌｅｎｇｅｄ公司　ＰＥ－ＣＤ１７８单克隆抗体　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　美国ｂｉｏｌｅｎｇｅｄ公司　ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ细胞凋亡试剂盒