微生物学检验实验：葡萄球菌属、链球菌属和肠球菌属的培养和鉴定.pptVIP

Culture Catalase(+) Coagulase test DNA enzyme test Gram stain Gram-positive，cocci，clusters Clone pigment，β-hemolysis Microbiology Laboratory diagnosis 葡萄球菌属、链球菌属和肠球菌属的培养和鉴定 一、目的要求 掌握葡萄球菌、链球菌和肠球菌的菌落特点、菌体形态及染色性。 掌握葡萄球菌、链球菌和肠球菌的分离培养、鉴定方法和常用鉴定实验。 二、器材和试剂 1.菌种：金葡、表葡、腐生，化脓链、无乳链 2.培养基：MH平板、血平板、甘露醇发酵管、胆汁七叶苷斜面培养基。 3.试剂：革兰染色液、3%H2O2、新鲜血浆。 4.其他：新生霉素、杆菌肽 、Optochin纸片、生理盐水、载玻片等。 三、菌落特点、菌体形态及染色性 葡萄球菌 革兰阳性球菌 呈单个、成双、短链（液体培养基或脓汁中）或成簇排列呈葡萄串样，某些菌株能形成荚膜 衰老、死亡、被中性粒细胞吞噬 G- grape-like clusters Staphylococcus aureu 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus epidermidis 表皮葡萄球菌 链球菌 革兰阳性球菌， 呈链状排列，链的长短和细菌的种类及生长环境有关 肺炎链球菌 呈矛尖状，宽端相对尖端向外，成双排列 无芽胞、无动力，但能形成荚膜和粘液层 化脓性链球菌 无乳链球菌 肠球菌 革兰阳性球菌、呈单个，成对或短链状排列，琼脂平板上生长的细菌呈球杆状 无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛 球菌相关的鉴定试验 1.触酶试验 原理： 具有过氧化氢酶的细菌能分解过氧化氢生成水，并释放出初生态氧，因生成氧分子而出现气泡。 2.凝固酶试验 原理： Sau能产生结合型血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成凝集颗粒；游离型的血浆凝固酶则可使试管中血浆发生凝固。 3.DNA核酸酶试验 原理： 某些细菌产生DNA酶，可使长链DNA水解成寡核苷酸链。因为长链DNA可被酸沉淀，寡核苷酸链则溶于酸，所以当在菌落平板上加入酸后，会在菌落周围出现透明环。 4.甘露醇发酵试验 原理：致病性葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸，使培养基由紫色变为黄色。 5.新生霉素敏感性 6.杆菌肽敏感试验 原理 A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。 7.CAMP试验 无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用，在两菌(B群链球菌和金葡）)的交界处溶血力增加，出现矢形的溶血区。 本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验 8. 胆汁七叶苷实验 方法：待测菌接种胆汁-七叶苷琼脂培养基，35度孵育18-24h。 结果：细菌生长，培养基变黑色为阳性，不变色为阴性。 9. 65g/LNaCL生长试验 方法：将肠球菌接种于高盐肉汤培养基中，孵育18-24h。 结果：有细菌生长为阳性，不生长为阴性。 四、注意事项 1.触酶试验不宜用血平板上的菌落，会出现假阳性，陈旧培养物会丢失触酶活性而又出现假阴性。因此每次试验应做阴(链球菌)阳(金葡)对照。 2.凝固酶试验玻片法应注意控制好时间，10S内观察结果，且必须制备浓厚的菌悬液。 3.每个试验应设立空白对照、阴性对照。 抗O试验(ASO test)： 链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生相应抗体ASO，当两者中和后，在加入SLO乳胶试剂，因病人血清中ASO量很多，未被中和的抗体与乳胶试剂反应，产生凝集，为阳性；无凝集，为阴性。 原理：中和试验，用SLO检测血清中的ASO 方法：间接凝集 结果：效价大于400单位 意义：活动性风湿热及肾小球肾炎辅助诊断 How to make an identification? Case Male, 43ys Ankle infected with Staph Fever, T:38.3℃ Lab detection：blood culture（+） How to identify what kind of blood stream infection in this patient?