微生物学检验实验：微生物检验基本技术.pptVIP

3、固定 固定的目的： 1）使细胞质凝固，以固定细胞形态； 2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。 固定方法： 涂面朝上，通过火焰数次 注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜， 否则会改变甚至破坏细胞形态 操作步骤（continued） 2、干燥 室温自然干燥 4、染色 ◇ 将玻片平放于桌面上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜） 操作步骤（continued） 5、水洗 倒去染液，用洗瓶（或自来水）轻轻冲洗，直至涂片上流下来的水无色为止。 Note: 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。 7、镜检 一般使用油镜（100倍）观察细菌个体形态。 操作步骤（continued） 6、干燥 自然干燥 ，也可用吸水纸吸干。 Notes: 必须等涂片完全干后才可滴加香柏油 油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净，否则可能损害镜头 3）擦油镜镜头方法： A）先用擦镜纸揩去镜头上的香柏油 B）用擦镜纸沾少许乙醚酒精（二甲苯），擦拭镜头； C）再用一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的乙醚酒精。 操作步骤（continued） 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 一、分离和接种技术 实验名称 细 菌 菌落形态特征 色素 气味 溶血 生长状态 实验报告 绘出金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的反应性。 1．你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 2、进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色出现什么问题？ 实验报告 二、细菌涂片和革兰染色 1、平板划线接种法 （2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环 先将接种环的接种丝部分置于火焰中 再直接烧灼金属环直至烧红 然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰2~3次 将接种环移开火焰，待其冷却。 1、平板划线接种法 图2-4 灭菌接种环 1、平板划线接种法 （3）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌 的平板，右手持接种环在菌落顶端轻轻挑取适量菌种 1、平板划线接种法 （4）分离划线接种细菌（四区接种法） ①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。 ②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板1/5），此视为二区。 1、平板划线接种法 ③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板1/4），此为三区。 ④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。 1、平板划线接种法 （5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放，送进37℃温箱培养。 （6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。 1、平板划线接种法 图2-5 四区划线 2、斜面培养基接种法 常用于细菌的大量繁殖，保存菌种，或观察其某些生化特性。琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可用此法接种。 2、斜面培养基接种法 步骤： （1）用记号笔在待接种的培养管上写明标记。 （2）点燃酒精灯。 （3）左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌 种与待接种的培养基管，使菌种管位于左侧， 斜面部均应向上。 （4）以右手拇指和食指捏持转动两管试管塞，以 便在接种是易于拔取。 （5）右手持接种环，在火焰上烧灼灭菌。 2、斜面培养基接种法 （6）以右手手掌及小指，小指及无名指分别拔取并 夹持两管试管塞，将两管管管口灭菌。 （7）将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内，从 斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种管。再伸进 待