微生物学检验实验：支原体、衣原体的检测.pptVIP

试剂组成 沙眼衣原体抗原快速检测试剂卡： 包被有抗衣原体脂多糖单克隆抗体-I、抗衣原体脂多糖单克隆抗体-II和羊抗鼠IgG试纸条 溶液A：NaOH溶液 溶液B：HCl溶液 样品处理管 参考范围 本产品对E型沙眼衣原体最低检出量为4*103IFU/ml， 检测结果≥ 4*103IFU/ml为阳性， ＜ 4*103IFU/ml为阴性 【检验结果的解释】阴性结果：仅质控线（C）有一条红线，检测线（T）无红线出现。阳性结果：除质控线外，另有一条红线出现在检测线（T）。 无效结果：质控线不出现红线，则结果无效。应更换新的检测试剂盒重复实验。可用剩余的已处理的样品或重新取样。注意：当检测线很强时，质控线可能相对减弱，此属正常现象。 实验内容： 支原体、衣原体的检测 没有细胞壁的原核细胞型微生物 呈高度多形性 细胞膜含固醇 能通过0.45?m滤菌器 二分裂繁殖，含DNA与RNA 能在无生命培养基中繁殖的最小微生物 支原体 (Mycoplasma) 营养要求较高，培养需加入10%-20%的血清 在pH7.8~8.0间生长，低于7.0则死亡（解脲脲原体pH6.0~6.5） 生长缓慢 典型的菌落呈荷包蛋样 液体培养基不易见到混浊 是引起细胞培养污染的一个重要因素 Mycoplasma infection in cell culture 无细胞壁 高度多形性 对作用于细胞壁上的药物均耐药 可通过滤菌器 培养条件相似（高渗） 支原体与细菌L型的共性 细菌细胞壁的肽聚糖结构受到理化或生物因素的直接破坏或合成被抑制，这种细胞壁受损的细菌一般在普通环境中不能耐受菌体内的高渗透压而胀裂死亡。这种细胞壁受损的细菌能够生长和分裂者称为细菌细胞壁缺陷型或细菌L型（L form） 支原体与细菌L型的区别 支原体 L型 在遗传上与细菌无关 与原菌相关，常可以回复 细胞膜含高浓度固醇 细胞膜不含固醇 生长慢，菌落小， 菌落稍大， 液体培养混浊度极低 液体培养有一定混浊度 主要致病性支原体 （一）肺炎支原体 原发性非典型肺炎 primary atypical pneumonia （间质性肺炎） 占非细菌性肺炎的三分之一以上 飞沫传播，夏末秋初为好发季节 症状较轻，发热、咳嗽、与感冒症状相似，有时有呼吸道外并发症 （二）泌尿生殖道感染支原体 解脲脲原体、人型支原体 传播途径：性传播、垂直传播 非淋菌性尿道炎 自然流产、出生缺陷、死胎、不孕（育） （三）穿透支原体 穿透支原体是1990年首次从1例HIV阳性艾滋病患者尿中分离出的一种新支原体 穿透支原体感染 是艾滋病的辅助致病因素 严格细胞内寄生 有独特发育周期 能通过滤菌器 原核细胞型微生物 衣原体 Chlamydia 革兰阴性，圆形或椭圆形体； 具有细胞壁，其组成与革兰阴性菌相似； 有独特的发育周期，行二分裂方式繁殖； 有核糖体和较复杂的酶类，但缺乏供代谢所需的能量来源，营专性细胞内寄生 对多种抗生素敏感 独特的发育周期 原体（elementary body，EB） 始体（initial body） 生物学性状 原体（elementary body, EB） 始体（initial body） [网状体（reticulate body, RB）] 小 大 有致密的类核结构，有胞壁，发育成熟 体大，电子致密度较低，无胞壁 Giemsa 紫色，Macchiavello 红色 Macchiavello 蓝色 高度感染性（有毒性） 无感染性（无毒性） 无繁殖能力 代谢活泼，以二分裂方式繁殖 胞外稳定性强 胞外稳定性弱 包涵体含糖原，被碘液染为棕褐色 实验内容 支原体培养、鉴定药敏 沙眼衣原体抗原检测（胶体金法） 支原体培养、鉴定药敏 本试剂盒适用于解脲支原体（Uu）、人型支原体（Mh） 原理： 当Uu和Mh生长时，尿素和精氨酸分解生成的碱性物质引起pH上値上升，培养基由黄色变成红色。培养基内加抑菌剂，可抑制生殖道中的细菌和真菌的生长。 培养基：支原体基础肉汤、马血清、混合抗生素、生长因子、尿素、精氨酸、酚红指示剂等。 标本采集 男性：用无菌棉拭子插入尿道约2cm处旋转，静止数秒钟后取材。 女性：支原体标本抹去宫颈口粘液，用无菌拭子插入宫颈管l－2cm旋转取材。 尚可用前列腺液、精液、尿液离心沉淀物作标本。 支原体对细胞表面有很强的亲和力，应尽可能多采集