天冬酰胺酶的提取和活性测定.pdfVIP

天冬酰胺酶的提取和活性测定 天冬酰胺酶催化天冬酰胺水解生成天冬氨酸和氨。 生成的氨与奈氏试剂反应产生红色络合物，用比色法测定氨的生成量以表示酶的活性。 1.仪器设备 高速离心机、光电比色计等。 2.操作方法 1）酶粗提液的提取：材料可用固氮菌或植株根、叶等。每克植物材料用2mlKH PO 缓冲 2 4 液 （25mmol/L，pH7.5；含0.5mmol/L2-巯基乙醇和0.03%Triton-X100）于研钵中研磨提取。过 滤后，用9000×g 离心5min，取上清液备用。 2）酶的活性测定 + （1）作标准曲线：取几支试管，分别加入不同量的标准铵溶液 （15μmolNH /ml），并加 4 水到8ml，使铵离子含量在0～15μmol 范围内，再加2ml 奈氏试剂 （奈氏试剂见6