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吡虫啉对克氏原螯虾的安全性评价 吡咯啉是我国最新发展最快的新烟碱类药物，可以预防和治疗各种抗性疾病。它具有广阔的抗虫性，抗虫性和致动性，对大多数刺槐性牙齿昆虫有特殊作用，并具有很大的发展前景。 农药给水产养殖业带来危害的事件屡见不鲜。1962年在日本北海道,由于在稻田中使用五氯酚钠,一次有超过9万t的鱼被毒死 1 材料和方法 1.1 德国法上的标准 60%吡虫啉悬浮剂(有效成分为300 g/L,中国农科院植保所廊坊农药中试厂);吡虫啉标准品(纯度99.8%)(德国 Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司);乙酸、乙腈、甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯(色谱纯;美国CNW公司);C18粉、乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、石墨化炭黑粉(GCB) (博纳艾杰尔科技公司);超纯水(电阻率为18.2 MΩ·cm,美国Millipore公司)。 1.2 试验动物 试验所用的克氏原鳌虾( 1.3 试验计划和采样 1 克氏原鳌虾组织中吡虫啉的检测 选取吡虫啉质量浓度0.2 mg/L(参考郑岚等 暴露后的第2、4、6、8、12、24、48、72、96、120、144小时分别从试验组随机取18只克氏原鳌虾,6只为1个平行,先用纯净水冲洗虾体表面残余药物,再用干净的纱布吸取虾体表面水分,采集肌肉、血淋巴、鳃组织、肠道、肝胰脏等组织测定吡虫啉的含量。肌肉、肝胰脏、血淋巴取样方法参考岳刚毅 2 田间范围试验 试验地点在湖北省应城市稻虾养殖示范基地,围取长宽高5 m×4 m×0.2 m种植水草的水田,四周垒梗作为试验区域。60%吡虫啉悬浮剂以0.2 mg/L(参考郑岚等 1.4 质谱条件和质谱离子束 液相色谱柱:Symmetry C18柱(100 mm×2.1 mm×3.5 μm,美国Waters公司);柱温:40 ℃;流速为300 μL/min;流动相A:80%甲醇,B:20%水,进样量为10 μL。 质谱离子源:加热大气压电喷雾HESI;离子化模式:正离子模式;扫描方式:选择离子反应监测模式(SRM);喷雾电压:3 500 V;蒸发气温度:200 ℃;鞘气和辅助气均为高纯氮气,压力均为500 kPa;碰撞气为高纯氩气,200 Pa;离子传输毛细管温度:350 ℃;一级质谱扫描(Q1 )半峰宽: 0.7 ku,三级质谱扫描(Q3 )半峰宽: 0.7 ku。 1.5 样品提取和净化 克氏原鳌虾组织、水样、底泥样品的前处理方法参考笔者所在研究室已发表文献 1.6 流动相标准液 准确称取适量吡虫啉标准品,用甲醇溶解制得质量浓度为100 mg/L的标准储备液,避光贮存在4 ℃冰箱;根据需要用流动相稀释标准储备液,配制质量浓度为0.1、0.2、0.5、2.0、5.0、10.0 μg/L的一系列标准工作液。 取空白克氏原螯虾样品按照本文“1.5”进行处理,定容得到空白样品溶液,然后用空白样品溶液稀释吡虫啉标准储备液,配制吡虫啉质量浓度为0.2～50.0 μg/L一系列范围的空白基质匹配标准溶液。 2 结果与分析 2.1 吡虫啉的检测 以色谱峰面积为纵坐标,对应的浓度为横坐标,绘制标准曲线。测定结果表明,吡虫啉在质量浓度为0.2～50.0 μg/L范围内线性关系良好,相关系数≥0.990 4。以信噪比 2.2 定量和定量测定 通过比较基质匹配标准曲线与溶剂标准曲线斜率值来评价基质效应,比值越接近1,基质效应越小,比值越远离1,基质效应越大。基质效应小,溶剂标准曲线可直接用于定量分析;基质效应较大,为了消除基质效应,采用基质标准曲线进行定量。试验结果表明,吡虫啉在克氏原螯虾肌肉、血淋巴、鳃组织、肠道、肝胰脏的基质比率分别为0.42、1.07、1.01、1.03、0.67,其中肌肉和肝胰脏基质效应较大。 2.3 加回收率的测定 取已制备好的克氏原螯虾、水样和底泥的空白样品,分别在样品中添加低、中、高浓度的吡虫啉标准品各5份,按本文“1.5”方法进行样品提取和净化,测定样品回收率。结果表明,吡虫啉在克氏原鳌虾样品中的平均添加回收率为62.64%～104.79%,变异系数为1.15%～11.93%,吡虫啉在水样中的平均添加回收率为88.29%～110.42%,变异系数为2.16%～3.25%,吡虫啉在底泥中的平均添加回收率为89.38%～116.60%,变异系数为2.05%～7.51%,表明该方法的准确度和精确度能满足农药残留测定的要求。 2.4 在室内试验中，酪氨酸酶的丰富 1 吡虫啉在肝胰腺和肠道组织中的富集 由表2可知,吡虫啉在推荐使用的质量浓度下,肌肉的富集曲线呈现先上升后下降的趋势,在推荐使用质量浓度下暴露的前6 h中,吡虫啉的累积含量上升速率较平缓,然后呈现上升趋势,并在24 h达到最大累积量101.09 μg/kg。肝胰脏的富集曲线与肌肉相似,推荐使用浓度