复方地芬诺酯对保健食品润肠通气功能小鼠的影响.docxVIP

复方地芬诺酯对保健食品润肠通气功能小鼠的影响 在对便秘动物模型的检验中，应考虑不同的食品特性。目前，具有润肠排便功能的食品包括药食源型中药制剂、维生素类、活血酶制剂和双因素。由于保健食品中药制剂含量不能过高, 药效评价中使用的小鼠便秘模型不适合保健食品的功能检测, 我们针对保健食品润肠通便功能检测的小鼠便秘模型进行了研究, 提出了保健食品润肠通便功能检验中建立小鼠便秘模型的一种方法。 1 材料和方法 1.1 动物生活 复方地芬诺酯片, 为止泻药, 每片含复方地芬诺酯2.5 mg, 由江苏国营武进制药厂制造 (苏卫药准字82-2464-1号) , 人体使用剂量为一日3～4次, 每次1～2片, 即人体每日推荐使用剂量为0.125～0.333 mg/Kg BW。 由于种属关系, 按人体每日最大推荐量0.333 mg/kg BW计, 小鼠每日等效作用量为3.3 mg/kg BW。 中国医学科学院肿瘤研究所实验动物中心提供的二级昆明种健康雄性小鼠 (批准号为京动字8910M050) , 体重20～23 g。 分析天平、动物天平、秒表、手术剪、眼科镊、灌胃针及注射器、动物笼具、苦味酸。 墨汁的配制:准确称取阿拉伯树胶100 g, 加水800 mL, 煮沸至溶液透明, 称取活性碳 (粉状) 50 g加至上述溶液中煮沸3次, 待溶液凉后加水定容到1 000 mL。复方地芬诺酯混悬液的配制:取复方地芬诺酯片, 用研钵研碎后加水配制成所需浓度的复方地芬诺酯混悬液。 1.2 方法 1.2.1 单氟二苯基巴比妥酸的制备 1.2.2 小鼠主流式墨汁灌胃 取小鼠40只, 随机分为4组, 每组10只, 分别为摄入复方地芬诺酯10、5和3.3 mg/kg BW组和空白对照组, 实验组以相应剂量的复方地芬诺酯灌胃, 对照组给水, 30 min后, 各组小鼠均以墨汁灌胃 (首粒粪便指示剂) , 从给墨汁开始记录小鼠首粒黑便的排出时间和不同时段内的排便粒数。 1.2.3 两组患者试验前和试验后24h停食改性 取小鼠20只, 随机分为2组, 每组10只, 分别设为复方地芬诺酯10 mg/kg BW组和空白对照组, 试验前24 h停食给水。试验组以复方地芬诺酯灌胃, 对照组给水, 30 min后两组小鼠分别以墨汁灌胃, 从给墨汁开始记录首粒黑便的排出时间、不同时间段的排便粒数。 2.4 重复实验 3 结果与讨论 3.1 复方地芬诺酯对小鼠粪便重量的影响 从表1可以看出, (1) 复方地芬诺酯的给药量与药效作用间存在明显的剂量—反应关系:随着复方地芬诺酯用量的增加, 小鼠首粒排便时间延长, 12h内排便粒数和排便重量减少, 其相关系数分别为0.9609、-0.9998和-0.9758。 (2) 当复方地芬诺酯用量为5 mg/kg BW时, 实验组小鼠的首粒排便时间与对照组比较出现极显著性差异 (P0.01) , 但12h内排便粒数和排便重量无显著性差异 (P0.05) ;当复方地芬诺酯用量为10 mg/kg BW时, 实验组与对照组小鼠的首粒排便时间比较差异极显著 (P0.01) , 12 h内排便粒数也出现了显著性差异 (P0.05) , 但12 h内排便重量仍无明显差异 (P0.05) , 这说明5 mg/kg BW和10mg/kg BW复方地芬诺酯的有效药理作用不能持续12 h。 (3) 当复方地芬诺酯用量为25 mg/kg BW时, 实验组小鼠的首粒排便时间、12 h排便粒数和排便重量与对照组比较均出现极显著性差异 (P0.01) , 即25mg/kg BW复方地芬诺酯的有效药理作用能持续12h。 (4) 粪便重量与排便粒数比为不敏感指标, 这主要是因为粪便经常与水、尿和饲料混杂在一起, 影响实验结果。 在实验中发现, 当复方地芬诺酯用量为50 mg/kg BW时, 个别小鼠12 h无粪便排出, 解剖发现其膀胱过度充盈, 从结果可以看出, 50 mg/kg BW复方地芬诺酯模型组与对照组首粒排便时间分别是344 min和22min, 这可能是复方地芬诺酯过度抑制平滑肌的结果。通过多次试验发现, 此毒性作用发生率为10%～20%。 由于禁食小鼠食用垫料, 使胃肠道内有残留粪便, 致使首粒排便时间难以代表便秘模型小鼠的肠蠕动情况, 考虑选用适当的首粒粪便指示物———墨汁。 3.2 复配中聚糖酯用量对首粒排气时间的影响 由表2可见, (1) 小鼠的首便时间、排便粒数和排便重量与复方地芬诺酯用量间存在明显的剂量反应关系:当复方地芬诺酯用量为3.3 mg/kg BW时, 首粒排便时间与对照组比较即出现极显著性差异 (P0.01) , 随着复方地芬诺酯用量的增加, 首粒排便时间在不断增加。 (2) 3.3 mg/kg BW和5 mg/kg BW复方地芬诺酯的有效药理作用时