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小鼠便秘模型建模方法的初步探讨 抗教学药物的研发滞后 便秘是临床上常见的症状，指大便隐匿于肠道超过48小时的大便，大便中的水分流失过多，粪便失去过多，大便结构干燥，狭窄的肛门管容易穿越肛门，运输时间延长，排便次数减少，因此很难立即排便。通常，3.5天或更长时间。我国慢性便秘发病率高达20%, 约有50%~60%的人曾经受到便秘的困扰, 以老年人、妇女及儿童最常见。便秘时, 宿便堆积在肠道里, 不断产生各种毒气、毒素, 造成肠内环境恶化、肠胃功能紊乱、内分泌失调、新陈代谢紊乱等, 严重影响人们的生活质量。便秘不仅成为肛肠病发病的诱因, 还可加重许多全身性疾病。而目前, 抗便秘药物的研发仍显得比较滞后, 便秘动物模型的建立明显不足, 缺乏对药物作用机理的深入研究。因此, 确立一种简单、高效并且与人类便秘特征较为相似的动物模型迫在眉睫。本研究参考了相关文献, 对四种小鼠便秘模型的建立方法进行了比较, 旨在找到更加简单易行、高效的便秘造模方法, 为便秘治疗药物的研发提供实验基础。 1 材料和方法 1.1 实验动物及饲养 雄性昆明纯种小白鼠40只, 体重18~22 g, 由大连医科大学实验动物中心提供 (清洁级) , 均自由饮水、进食, 饲养室温 (22±2) ℃。 1.2 药品、试剂和仪器 复方地芬诺酯片:每片含盐酸地芬诺酯2.5mg、硫酸阿托品25μg, 长春长红制药有限公司生产, 批号 临用前配制成所需浓度的复方地芬诺酯混悬液;北海硫糖铝咀嚼片0.25g*100片, 北海阳光药业有限公司生产, 批号阿拉伯树胶粉由成都科龙化工试剂厂进口分装, 批号活性炭 (粉末) 北京木材加工厂生产;炭粉液 (墨汁, 首粒黑便指示剂) 的配制:准确称取阿拉伯树胶100 g, 加水400 ml配成0.25%透明溶液, 再将活性碳粉50 g加至上述溶液中煮沸3次, 待溶液冷却后加水定容至500 m L, 于4℃冰箱保存, 临用前摇匀, 并加入等量蒸馏水, 制得碳粉液 (墨汁) 待用。 1.3 实验方法 1.3.1 动物的单次给药和人工联合灌胃 10只小鼠随机分为复方地芬诺酯组 (8只) 和阴性对照组 (2只) 。实验前1天记录10只动物首粒排黑便时间和在2h内排便的粒数及重量, 并将各组小鼠禁食不禁水16 h, 于次日测定时, 模型组给予复方地芬诺酯混悬液 (5 mg/kg) 灌胃, 阴性对照组给予等容量蒸馏水;30 min后再给碳粉液指示剂, 动物单笼喂养, 正常饮水和进食, 从灌墨汁开始记录每只动物首粒排黑便时间和在2h内排粪便的粒数及重量。 1.3.2 单次饮水方式 10只小鼠随机分为禁水不禁食组 (8只) 和阴性对照组 (2只) 。试验前1天记录小鼠首粒排黑便时间和在2h内排便的粒数及重量, 限制水量:于第一、二天分别给予前五日平均水量的1/6, 第三至六日给1/3, 取整数值。给水方法:对限水小鼠采用普通饮水瓶手持辅助饮水的方法。每天分两次给水, 间隔12小时, 分别给予一日水量的1/3和2/3, 间断饮尽。30 min后再给炭粉液指示剂, 动物单笼喂养, 从灌墨汁开始记录每只动物首粒排黑便时间和在2h内排粪便的粒数及重量。 1.3.3 便时间及排气 10只小鼠随机分为硫糖铝组 (8只) 和阴性对照组 (2只) 。试验前1天记录20只动物首粒排黑便时间和在2h内排便的粒数及重量。给药方法:将硫糖铝配制成质量浓度为0.5 g/L的溶液, 每天按1 m L/只灌胃小鼠1次, 连续2 d, 第3天剂量减半, 30 min后再给炭粉液指示剂, 动物单笼喂养, 正常饮水和进食, 从灌墨汁开始记录每只动物首粒排黑便时间和在2h内排便的粒数及重量。 1.3.4 灌墨汁添加量的确定 10只小鼠随机分为禁水不禁食 (8只) 和阴性对照组 (2只) 。实验前1天记录每只动物首粒排黑便时间和在2 h内排便的粒数及重量, 连续给0℃冰水混合物7天后给炭粉液指示剂, 动物单笼喂养, 正常饮水和进食, 从灌墨汁开始记录每只动物首粒排黑便时间和在2 h内排便的粒数及重量。 1.4 统计学分析 计量资料数据用均数±标准差 (ue0af±s) 表示, SPSS 10.0统计软件分析, 采用单因素方差分析, 用SNK-q检验进行两两比较, P0.05为差异有统计学意义。 2 小鼠肝胰腺保乳手术后两期排放检查 如表1、图1、图2、图3所示, 与正常对照组比较, 灌胃复方地芬诺酯、禁水不禁食、硫糖铝及冰水法四种造模方法均可使小鼠首粒黑便排便时间显著延长、2小时内排便粒数及排便重量显著减少 (P0.05) 。但采用复方地芬诺酯、禁水不禁食法处理的小鼠较经口灌胃胃肠运动抑制剂硫糖铝及经口灌胃冰水诱导的小鼠首粒黑便排便时间显著