短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯与性质研究.pdfVIP

2008年 1O月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 43卷 第 6期 166～169 JOURNALOFGANSU AGRICULTURALUNIVERSITY 双 月 刊 短小芽孢杆菌碱性蛋 白酶的提纯与性质研究 褚忠志 ，于 新 (1．甘肃农业大学食品科学与工程学院，甘肃 兰州 730070；2．广东仲恺农业技术学院，广东 广州 51000) 摘要：将短小芽孢杆菌(Bacillus户“z“s)zkud2O2—4液体的发酵液离心去菌体，用硫酸铵盐析得粗酶t透析除 盐后进行 SephadexG-75柱层析得到电泳纯碱性蛋 白酶 ．用该法提纯的碱性蛋 白酶比活力从粗酶液的 155．5U／mg 提高到了954U／rag，回收率为 27．6 ．该酶水解酪蛋白的最适反应温度为 5O℃．最适作用 pH为 1O。且该酶具有 较高的热稳定性和耐碱性．．经 SDS测定，其分子质量约为 2．5ku． 关键词 ：短小芽孢杆菌；碱性蛋 白酶 ；提取纯化 ；性质 中图分类号：Q939．9 文献标识码：A 文章编号：1003—4315(2008)06—0166—04 Purificationandpartialpropertiesofalkalineprotease Zkud202．．4from Bacilluspumilus CHU Zhong—zhi，YU Xin。 (1．CollegeofFoodScienceandEngineering，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China； 2．ZhongkaiAgrotechnicalCollegeofGuangdong，Guangzhou51000，China) Abstract：Thefermentedliquitmedium byBacilluspumilusstrainZkud202—4wascentrifuged，andthe supernatantswerepurified throughtheprocessinvolvingammonium sulfateprecipitation，SephadexG一75 filtration．Thespecificactivityofenzymewasincreasedfrom 155．5U／mgto954U／mgwiththerecovery of27．6 ．TheoptimaltemperatureandpH forcaseinhydrolysiswere50℃ and10respectively．Thepuri— fiedproteinasewasdemonstratedtobeheatstableandsuitableinalkaline．Thealkalineproteaseofelectro— phoretichomogeneitybySDS—PAGEshowedtheproductwasaproteinwithamolecularweightof2．5ku． Keywords：Bacilluspumilus；alkalineprotease；purification；property 碱性蛋白酶是商品蛋 白酶中应用最广、产量最 次层析后得到电泳纯组分，并测定了纯酶的分子质 大的一类蛋白酶，主要应用于加酶洗涤剂、制革、丝 量为 2．5ku．为了将短小芽孢杆菌 Zkud202—4的酶 绸、医药等领域[1]．1970年 Keay等[2研究了 B． 学性质与 目前碱性蛋白酶生产菌所产酶的酶学性质 subtilis和B．1icheniformis碱性蛋白酶 ，通过离子 进行比较，本试验从该菌株的发酵液中提纯 了碱性 交换层析等方法将它们分离纯化，并把这些酶命名 蛋白酶 ，并对其酶学性质进行了研究． 为芽孢杆菌肽酶．在 国内7O年代 由河南皮革研究