不同浓度乳铁蛋白对原代大鼠成骨细胞增殖的影响-内科学(内分泌与代谢病)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目录 中英文缩略词表………………………………………………………………..……3 中文摘要……………………………………………………………………………..4 英文摘要……………………………………………………………………………..6 前言…………………………………………………………………………………..8 正文 乳铁蛋白对原代培养的大鼠成骨细胞增殖的影响……………………….11 一 材料………………………………………………………………………....11 二 方法…………………………………………………………………………12 三 结果…………………………………………………………………………16 四 结论…………………………………………………………………………19 全文总结……………………………………………………………………………..21 参考文献……………………………………………………………………………..22 致谢…………………………………………………………………………………..25 综述…………………………………………………………………………………..26 2 中英文缩略词表 缩写 英文全称 中文全称 LF lactoferrin 乳铁蛋白 DMEM Dulbeceo’S modified eagle’S Mediu 达尔伯克(氏)改良伊格(氏)培 养基 CCK8 Cell Counting Kit-8 细胞增殖--毒性检测试剂 盒 ALP alkaline phosphatase 碱性磷酸酶 BMD bone mineral density 骨密度 EDTA ethylenediamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 mRNA messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 OB osteoblast 成骨细胞 OP Osteoporosis 骨质疏松 PBS phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲溶液 SD sprague-dawley SD 种系鼠 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 3 不同浓度乳铁蛋白对原代大鼠成骨细胞增殖的影响 目的： 中文摘要 观察不同浓度的乳铁蛋白（Lactoferrin LF）对原代大鼠成骨细胞增殖的影响，探 讨低浓度乳铁蛋白（100ug/ml）及高浓度乳铁蛋白（100ug/ml）与成骨细胞增 值的关系，为乳铁蛋白的进一步研究提供参考依据。 方法： （1）采用混合酶法从 SD 乳鼠头盖骨中分离原代大鼠成骨细胞，通过采用多次 “差速贴壁法”对成骨细胞进行纯化。光镜下观察细胞的形态结构和生长状况， 并用碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色鉴定。 （2）取第二代成骨细胞，以 3000 个/孔的细胞数量种于 96 孔板，不同浓度乳铁 蛋白干预成骨细胞，乳铁蛋白浓度分别为 0.1ug/ml，1ug/ml，10ug/ml，100ug/ml， 200ug/ml，400ug/ml，600ug/ml，800ug/ml，1000ug/ml，在 1,3,5,7 天后分别采用 CCK-8 法测定细胞增殖。 （3）统计学方法：各实验数据采用 x ±ｓ表示，应用 SPSS17.0 统计软件进行统 计分析，各组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA)。P﹤0.05，差异有 统计学意义。 结果： (1)原代培养的细胞具有成骨细胞的典型特征，形态多样，呈三角形、多边形、 长梭形等形态，有长短不一的突起，可见胞核，并伸有粗大伪足；碱性磷酸酶染 色及Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。 (2)CCK-8 法结果显示：干预第一天，1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml 浓度乳铁蛋白 组细胞增殖均明显高于对照组（p0.01），200ug/ml、400ug/ml、600ug/ml 组均低 于对照组（P0.05）, 800ug/ml 和 1000ug/ml 低于对照组（P0.01）。干预第三天， 0.1ug/ml、1ug/ml 组吸光度值高于对照组，差异有统计学意义（p0.05），而 10ug/ml、100ug/ml 组较对照组升高，有显著统计学意义（p0.01），200ug/ml 组 吸光度值低于对照组，但差异无统计学意义（P0.05）, 400ug/ml 组吸光度值低 于对照组，差异有统计学意义（P0.05），600ug/ml、800ug/ml 和 1000ug/ml 组 吸光度值低于对照组，差异有明显统计学意义（P0.01）。干预第五天，0.1ug/ml、 4 1ug/ml、10ug/ml 组均高于对照组(p0.05），100ug/ml 组明