色谱柱分离技术.docVIP

7. 5. 3柱色谱 柱色谱（Column Chromatography）是最常见的色谱分离形式，茨维特的色谱实验是一 个典熨例了。它具有高效、简便和分离容最较大等特点，常用于复杂样品分离和精制化合物 的纯化。 物质A 物质B 柱色谱主要有吸附色谱和分配色谱两类。前者常用氧化铝或硅胶为柱填料。后者以硅胶、 硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收一定最的特殊液体作为固定相。 7.5.3. 1吸附柱色谱法分离原理 吸附柱色谱法是利用备纟fl分在吸附剂与洗脱剂之间的吸附和溶解（解吸）能力的差异而 达到分离的。当组分分子到达吸附剂表面时，由于吸附剂表血和组分分子的相互作用，使组 分分了吸附在吸附剂表面。当洗脱剂连续通过吸附剂表面时，由于洗脱剂对纽分分了的作用 力，组分分了会被洗脱剂溶解下来，在一定的温度下，吸附和溶解达到平衡。但由于洗脱剂 不断地移动，这种吸附和溶解过程会反复发生并建立新的平衡，组分分了就随洗脱剂移动, 移动速度与组分分了的平衡常数和洗脱剂的流速行关。当流速一定时，各组分就依据吸附平 衡常数的不同而得到分离。 7. 5. 3. 2吸附色谱柱填料 在吸附色谱色谱屮，为了使试样屮备种在吸附能力稍有差异的组分能够分开，必须选择 适当的固定相（吸附剂）和流动相（洗脱剂）。吸附剂的选择主要根据吸附剂性质和分析要 求通过实验来现在。 对吸附剂的一般要求：（点击） 具冇较大的表面积和足够的吸附能力 对不同组分有不同的吸附能力 化学惰性，即不溶于流动相，不与样品组分和流动相起化学反应 颗粒均匀，具有一定的机械强度的粒度 一般采用白色或无色吸附剂，便于观察实验 常用的吸附剂硅胶、氧化铝、活性炭、聚酰胺、纤维素等。 （1） 硅胶 色谱硅胶是由弹性多聚硅酸脱水制成，其吸附屮心是硅醉基。硅酸性能稳定，是带有微 弱酸性的极性吸附剂，特别是它具有很好的情性、吸附容量大、容易制成备种不同尺寸的颗 粒。硅胶可用于分离酸性和中性物质，如有机酸、氨基酸、酹类和密体等。 （2） 氧化铝 色谱氧化铝由氢氧化铝在300^400°C时脱水制得，它吸附能力比硅胶强。氧化铝通常屮 性、酸性和碱性三种。在实际使用屮，酸性氧化铝5H4?5）主要用于有机酸、某些酯类、 酸性多肽类、酸性色索等化合物的分离。碱性氧化铝（pH9.5~10.5）主要用于碱性化合物的 分离。屮性氧化铝用于生物碱类、挥发油、帖类、油脂、树脂、皂貳类以及酸性、碱性氧化 铝可分离的化合物。 硅胶和氧化铝的吸附活性（点击） 硅胶和氧化铝的吸附能力与其含水量有关。通过加热方式除去吸附水，可提高吸附剂的 吸附活性。一般通过实验测定，将硅胶和氧化铝的活性分为五级（I~V）。I级硅胶的含水 量最少，它的活性最高，对极性化合物的吸附能力最强。 吸附剂活度与含水量的关系 含水盒附剂 氧化铝 硅胶 I 0 0 II 3 5 TTI 6 15 IV 10 25 V 15 38 聚酰胺（点rli） 色谱用聚酰胺是白色多孔性的非晶形粉末，它不溶于水及甲醇、乙醇、内?酮、 乙瞇、氯仿、苯等有机溶剂；对碱比较稳定，对酸的稳定性较差。聚酰胺分子内 存在很多的酰胺键，它与酚类、酸类、酿类、硝基化合物等形成氢键，可对这些 化合物进行吸附分离。 （5）吸附剂的选择 在分离极性较强的化合物时，一般选用活性较小的吸附剂。而分离极性较弱的化合物时, 就选用活性较大的吸附剂。极性吸附剂选择性地吸附不饱和的、芳香族的和极性分了。非极 性吸附剂如活性炭、硅藻土对极性分了无吸附能力。 7. 5. 3. 3吸附色谱洗脱剂 流动相的洗脱作用实质上是洗脱剂分了与样品组分竞争占一据吸附剂表面活性屮心的过 程。为了要使试样屮吸附能力稍有弟异的各种组分分离，应根据试样的性质，吸附剂的活性, 选择适当极性的洗脱剂。 化合物极性与英结构有关。按结构的特征，各种有机物的极性大小顺序为： 烷泾〈烯泾〈讎类〈硝基化合物〈酯类〈酮类〈醛类〈胺类 醇类〈酚类〈酸类 常用溶剂的极性大小顺序为： 石汕瞇 环己烷 四氯化碳〈苯 乙瞇 乙酸乙酯 丙酮 乙醇〈水 在进行吸附柱色谱分离时，应根据样品的性质、吸附剂的性能、流动相的极性三方面的 影响因素加于选择。一般的选择规律是：样品极性较大，在极性吸附剂柱上进行分离，则应 选用吸附性较弱（即活性较低）的吸附剂，用极性较大的溶剂进行洗脱。组分的极性较弱, 就应选用吸附性较强（即活性较高）的吸附剂，用极性较小的溶剂进行洗脱。 样品、吸附剂和洗脱剂的极性关系 极性强I 极性 强 I 弱 7. 5. 3. 4分配柱色谱分离原理 分配色谱是利用各组分在两种互不混溶溶剂间的溶解度羌异来达到分离的o在分配柱色 谱分离时，这两种互不混溶的溶剂之一是流动相；另一种是吸收在载体或担体屮的溶剂，例 如，含有一定量水分的硅胶，其所含的水分可作为固定相。当流