果蔬蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳.pdfVIP

果蔬蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、目的要求 掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析方法和测定果蔬组织中蛋白质分子量的 基本原理和实验技术。 二、基本原理 由于植物学来源和发育程度不同，果蔬组织的蛋白质种类、含量与组成成分 等各方面差异非常大。常常需要利用电泳技术进行研究果蔬蛋白质的变化。十二 烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳 （Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamide gel 测 electrophoresis，SDS）是一种能够分离和测定蛋白质组成的电泳方法，主 要用于测定蛋白质亚基分子质量。 检 带电粒子在电场中向带有相反电荷的电极移动，叫做电泳。若以V 代表球 形分子在电场中的移动速度，E 代表电场强度，q 为带电粒子所带电荷量，粒子 质 半径为r，溶液粘度为η，则V Eq6πrη，即电泳速度与电场强度和颗粒所带电荷 量成正比，而与颗粒的大小、溶液的粘度成反比。在一定的pH 条件下，每一种 分子都具有一定的电荷、大小与形状，在相同的电场经一定时间的电泳，便会集 液 中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。不同组分的蛋白质 （包括同功酶）分子 组成、结构、大小、形状均有所不同，在溶液中所带的电荷不同，在电场中的运 海 测 动速度也不同。 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作支持介质的一种电泳方法。它是 由丙烯酰胺单体 （Acrylamide，ACr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺 （N,N′-methylena 上 检 bisacrylamide，BIs）在引发剂 （过硫酸铵，AP）和催化剂 （N,N,N′,N′-四甲基乙 二胺Tetramethylenedismine，TEMED）的作用下，聚合交联而成的三维网状结 质 构凝胶，其网孔大小可由凝胶浓度和交联度加以调节。氧能抑制聚合反应，可根 据实验情况决定是否在聚合前对凝胶混合物进行脱气。ACr 和BIs 的浓度、交联 液 度可以决定凝胶的密度、粘度、弹性、机械强度以及孔径大小。100mL 凝胶溶 液中含有的单体和交联剂总克数为凝胶浓度，用T%表示。凝胶溶液中凝胶剂占 单体加交联剂总量的百分数称之为交联度，用C%表示。用公式表示如下： 测 海 (a b) T% 100 上 m 检 b C% 100 (a b) 质 式中a 为ACr 的质量（g），b 为Bis 的质量（g），m 为凝胶溶液总体积（mL）。 当a/b （W/W）＜10 时，形成的凝胶脆、硬，呈乳白色；a/b＞100 时，即使5%