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都庞岭自然保护区特有植物长果皂荚总皂苷提取工艺研究 0 其他特殊植物资源 根据《本草纲目》，枣荚果实具有驱风、驱毒、杀虫的功效。它可以用来治疗咳嗽、哮喘、肿胀、伤口、湿疹和其他疾病。皂荚 (属) 富含的皂甙, 具有多种生理活性和良好的药理作用, 如抗癌、调节免疫功能、防治心血管疾病、降血压、抗菌消炎、利尿、抗病毒、清热镇痛、抗过敏、护肝、抗疲劳、强壮筋骨等。此外, 皂荚还可作为绿色产业原料资源, 用于化妆品、洗涤品、灭火剂的开发利用。皂荚果中含有30%以上的皂苷, 是已发现的皂苷含量最高的木本植物资源。现代研究证明, 皂荚中的有效成分——皂苷还具有独特的生物活性 (如抗癌和抗胆固醇活性)。随着对此类产品需求量的不断增加, 皂苷在食品、化妆品、医药等行业的应用领域不断扩大, 要实现其完整的商业潜力, 还依赖于新工艺和加工策略的发展。 长果皂荚 (Gleditsia longoleguminosa) 是豆科 (Leguminosae) 苏木亚科 (Caesalpinioideae) 皂荚属 (Gleditsia), 为湖南省自然保护区特有品种, 目前尚未见任何有关这一特殊植物资源开发与利用方面的研究报道。因此, 笔者首次就长果皂荚皂苷提取工艺条件进行了探索性研究, 以期为这种特殊植物资源的进一步开发与利用提供参考。 1 材料和方法 1.1 实验时间和地点 室内实验于2011年6—12月在湖南科技学院生化系实验中心进行。 1.2 实验材料 长果皂荚采自湖南永州道县都庞岭地区, 晒干, 取其果实, 粉碎, 过100目筛。 1.3 主要成分 1.3.1 皂苷的提取与纯化称取25.0 g皂荚, 加水浸提, 多次浸提时水的用量第1 次为100 m L, 后续每次为50 m L, 合并浸提液;单次浸提时一次性添加浸提液;浸提液减压浓缩, 真空干燥、粉碎, 得粗皂甙, 称重。异丙醇溶解, 减压干燥, 得淡黄色总皂苷, 称重。总皂苷得率= (总皂苷干重/皂荚干重) ×100%。 1.3.2 皂苷的检测醋酸酐-浓硫酸反应, 有紫色物质产生证明有皂甙存在, 无紫色物质, 则无皂甙。 1.3.3 提取条件对皂苷得率影响的单因素实验考查不同温度、时间、次数、固液比条件下对总皂甙提取效率的影响。其中, 温度、时间、次数为多次提取;固液比为单次提取, 以考察在同等总浸提液用量的条件下, 单次浸提与多次浸提对总皂苷得率的影响, 各单因素变化条件, 见表1。 1.3.4 正交实验结合单因素实验结果, 考查温度、时间、提取次数对长果皂荚总皂苷得率的最优提取条件组合, 做L16(43) 正交实验, 选取的因素与水平, 见表2。 1.3.5 实验仪器与试剂 (1) 主要设备。旋转蒸发仪、真空干燥箱。 (2) 试剂。异丙醇、甲醇、乙醇乙酯、醋酸酐、浓硫酸均为AR级。 1.3.6 统计分析采用Excel软件对正交实验结果进行数据处理与分析。 2 结果与分析 2.1 多次浸提实验结果分析 2.1.1 固液比对皂苷得率的影响在浸提温度40℃, 浸提时间为6 h条件下, 控制1 次浸提水的用量分别为100 m L、150 m L、200 m L、250 m L、300 m L、350 m L、400 m L, 对应的固液比分别为1:4、1:6、1:8、1:10、1:12、1:14、1:16, 提取总皂苷并计算其最终得率, 结果如图1所示。 由图1 可知, 固液比从1:4 到1:10 增势明显, 之后趋于平缓, 可见提高浸提液的用量可提高长角皂荚皂苷的提取率, 但用水量过大势必造成浪费, 增加提取成本。因此, 1次浸提时固液比宜控制在1:12左右。 2.1.2 提取次数对皂苷得率的影响在浸提温度40℃条件下, 分别对长果皂荚粉浸提1~7次, 每次浸提6 h, 水的用量第1 次为100 m L, 后续浸提液为50 m L/次, 合并浸提液, 浓缩真空干燥, 并计算总皂苷得率, 所得结果见图2。 由图2可知, 多次浸提也呈现出与1次浸提几乎一致的变化趋势, 所不同的是总提取率略有提高 (见表3) , 当浸提次数超过3 次时, 总皂苷得率可提高1%左右。可见, 多次浸提较1次浸提更能减少总皂苷的损失, 提高提取效率。因此, 在同等总浸提液用量情况下, 宜采用多次浸提以提高总皂苷得率, 浸提次数以4 次以上为宜;同时, 在后续的正交实验中, 将不再考察单次浸提条件下固液比变化对总皂苷得率的影响。 2.1.3 提取温度对皂苷得率的影响在浸提3 次, 浸提时间为6 h的条件下, 研究浸提温度对总皂苷提取效率的影响, 所得结果如图3所示。 由图3 可知, 在20~40℃这一区间, 温度对提取效率有较大影响, 温度越高, 总皂苷得率越高;超过40℃则影响不大, 70~80℃总皂苷得率只提高了0