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银精巢结构与发育的形态学研究 在水产养殖条件下，鱼类的性情发育不同于自然环境。除了营养条件不同外,生境也存在着较大的差异,这也是人为调控其性腺发育的前提条件。通常在养殖条件下所求的目标是雌雄同步生产、产卵时间人为可控、繁殖周期延长、产卵频次增加等。但若不能完全掌控性腺发育所需要的环境因子及相互间的关系,致使积温不够、营养物质偏颇等情况发生,可能会导致鱼类产出的精子活力不够或卵子不能达到完全成熟,从而影响配子的发育和仔稚鱼的生长。研究养殖条件和自然环境中海水鱼类性腺发育的差异,揭示其异同点,有助于改进和完善养殖过程中的营养和环境因子的人为控制,从而对调控海水鱼类的性腺发育具有现实意义。 银鲳(Pampus argenteus)俗称镜鱼、白鲳等,归属鲈形目(Perciformes)鲳科(Stromateidae),鲳属(Pampus),是我国沿海重要的海产经济鱼类。具有很高的食用价值,在我国民众的食谱中占有较高的份额,影响面甚广。国内外学者对于银鲳繁育生物学的研究主要集中在营养物质需求、养殖环境、仔稚幼鱼生长发育、自然环境下卵巢发育的观察和精子的超微结构等方面,而养殖条件下银鲳性腺发育的研究却鲜有资料,精巢的形态学和组织学研究尚未见报道。本文通过采集养殖条件下和自然环境中的银鲳样本,对其精巢的形态、发育过程和组织学进行比较研究,分析其差异及其产生原因。研究结果对于银鲳性腺发育的人工调控具有重要的指导作用,同时也可为养殖条件下海水鱼类性腺发育提供参考数据。 1 材料和方法 1.1 银同时取样一次 2010年5月至2011年5月,每隔3个月对2种来源的银鲳同时取样一次。实验所用养殖银鲳取自全人工繁育所得到的子代,野生银鲳在浙江近海海域通过定置张网或流刺网获得。养殖池中和捕捞地的水温及收集的样品叉长和体重见表1。 1.2 切片染色及显微照片观察 每次各取8～12 ind,进行生物学测量后解剖,观察性腺的外部形态并拍摄记录。之后,将性腺取出用Bouin氏液固定,经梯度乙醇脱水、透明、石蜡包埋后,进行连续切片。切片厚度为6～8 μm, 切片经H.E.染色后在显微镜下观察。从中挑选出精巢切片,目测微尺度量,并进行显微拍照。根据银鲳性腺解剖学和组织学特征进行分期和时相划分,划分依据参照楼允东对鲢(Hypophthalmichthys molitrix)精巢划分方法。 2 结果 2.1 养殖和野生银的精巢及发育情况 银鲳精巢与其他大多数海水鱼类一样都是成对的,外形呈反“L”形,沿体腔后部紧贴腹膜。Ⅰ期的精巢为透明细丝状,紧贴腹膜,此时肉眼难以分辨雌雄;随着鱼体的生长发育,精巢成为浅灰色长带状结构,切片观察为Ⅱ期;Ⅲ期的精巢为灰白色片状结构,精巢表面开始出现细小的血管。Ⅲ期及Ⅲ期之前的精巢养殖与野生的银鲳没有多大差异;发育至Ⅳ期后,精巢继续增大,宽度开始增加,为乳白色片状,精巢表面的血管已经比较明显。此时,养殖银鲳的精巢前后粗细基本一致(图版Ⅰ-1),而野生的银鲳下半部分的末端明显膨大(图版Ⅰ-2);Ⅴ期精巢明显增大,不论养殖还是野生的银鲳轻压腹部均可从泄殖孔中流出白色精液,野生的性成熟雄鱼若用流刺网捕获,在流刺网上就能自行流出精液。解剖发现,其精巢饱满肥厚,占据腹腔中的较大空间,而同样个体大小的养殖银鲳精巢仅为野生银鲳的1/2～2/3,精巢的下半部分也未见如野生银鲳那样膨大饱满。养殖银鲳的性成熟指数为1.25～2.61,而野生银鲳可达到4.89。繁殖季节之后,养殖和野生银鲳的精巢均退化至Ⅲ期。经解剖发现,3龄的野生银鲳精巢边缘呈褶皱状,饱满度也不及1龄和2龄的银鲳,精巢上的血管模糊,在繁殖季节精巢颜色较低龄鱼暗,不如低龄鱼的精巢洁白。 2.2 细胞、精母细胞和嗜升级学细胞的结构 养殖与野生银鲳精巢中的生殖细胞在基本结构上无差异,仅大小略有不同。均可按常规方法划分为5类。 精原细胞:切片可见精原细胞体积较大,呈不规则的圆形,直径约为8.0～12.0 μm。细胞核较大,约占整个细胞的3/5～3/4(图版Ⅱ-1)。精原细胞由原始生殖细胞产生。 初级精母细胞:较精原细胞小,细胞直径约5.0～8.0 μm,镜检观察呈圆形或椭圆形,初级精母细胞是由精原细胞分裂形成,染色质丰富,染色比精原细胞要深(图版Ⅱ-2)。 次级精母细胞:是由初级精母细胞分裂产生。直径约3.0～4.0 μm,较初级精母细胞小,细胞核的嗜碱性进一步加强,染色更深(图版Ⅱ-3)。 精子细胞:直径约2.5～3.0 μm,染色很深,只有强嗜碱性的细胞核,精子细胞是由次级精母细胞分裂而来(图版Ⅱ-3)。 精子:高倍镜下观察呈椭圆形,长径约2.0 μm,短径约1.5 μm,是精巢中生殖细胞最小的一种(图版Ⅱ-4)。 2.3 银在生殖过程中的发育情况 养殖与野生银鲳精巢的组织结构没有差异,都属小叶型