GB 4789.49-2024食品安全国家标准　食品微生物学检验　产志贺毒素大肠埃希氏菌检验.pdf

GB

中华人民共和国国家标准

GB4789.49-2024

食品安全国家标准

食品微生物学检验

产志贺毒素大肠埃希氏菌检验

2024-02-08发布2024-08-08实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会唱舍

国家市场监督管理总局GX.I(J

GB4789.49-2024

食晶安全国家标准

食晶微生物学检验

产志贺毒素大肠埃希氏菌检验

1范围

本标准规定了食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌（ShigatoxinproducingEscherichiacoli,STEC）的

检验方法。

本标准适用于食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌的检验。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下。

2.1恒温培养箱：36℃±1℃、44℃±1℃。

2.2冰箱：2℃～5℃、18℃～20℃。

2.3天平z感量为0.001go

2.4均质器。

2.5旋涡振荡器。

2.6恒温水浴箱50℃～55℃、恒温金属浴99℃土1℃。

2.7离心机g最太转速至少16OOOgo

2.8实时荧光定量PCR仪。

2.9混匀仪．

2.10元菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。

2.11电动移液枪或吸耳球。

2.12无菌具塞锥形瓶＝容量250mL、500mL、1000mLo

2.13元菌培养皿E直径90mmo

2.14元菌均质袋带滤网，元菌均质杯。

2.15平盖八联排管或96孔PCR微孔板。

2.16磁珠分离富集装置。

2.17微量移液器及吸头：0.2µL~2µL、2µL~20µL、20µL~200µL、100µL~1000µL。

2.1810µL元菌接种环。

2.191.5mL元菌EP管，元菌微量离心管，元菌15mL离心管。

2.200.22µm孔径元菌过滤膜。

2.21全自动微生物生化鉴定系统。

2.22基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOFMS)o

3培养基和试剂

3.1改良膜蛋白陈大豆液体培养基（mTSB），见A.lo

3.2EC肉汤培养基（EC）：见A.2o

3.3膜蛋白陈大豆琼脂培养基（TSA）：见A.3o

3.4STEC显色培养基：见A.4o

1

GB4789.49-2024

3.5麦康凯琼脂培养基（MAC）：见A.5。

3.6脑心浸出液肉汤CBHl)-50%甘油：见A.60

3.70.85%灭菌生理盐水。

3.85%Chelex-100溶液：见A.70

3.9E-buffer榕液：见A.So

3.101mol/L盐酸榕液。

3.111×TE缓冲液：见A.9。

3.12元菌PBS缓冲液：见A.10。

3.13实时荧光定量PCR反应体系配制用试剂(10×buffer、dNTPs、Taq酶和ddH20）。

3.14STEC免疫磁珠分离相关试剂或等效试剂盒。

3.15生化鉴定试剂盒或生化鉴定相关试剂。

3.16具有菌种保藏资质单位提供的志贺毒素基因（Shigatoxingene,stx）阳性大肠埃希氏菌标准菌