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海南树仔菜浸膏不同提取方法的比较研究 海南木冬菜又称山茱萸、天绿香、木兰、灌木、多年生灌木，为塔列木科、大果木科多年生灌木。产于东南亚热带雨林，也被称为“保护宫木”。树仔菜长期以来一直在海南等热区普遍作绿篱大量种植,并摘其顶端幼嫩枝叶作蔬菜食用,其营养成分已有资料报道。 然而,自2005年一些媒体相继报道了有关树仔菜对镉有富集作用,引出树仔菜中镉超标对人产生毒害的问题,对海南树仔菜产业造成毁灭性的影响。为了重新振兴海南树仔菜产业,开展了关于树仔菜中多糖、精油等相关成分及生物活性的研究,该研究对推动海南树仔菜产业的立体式发展具有重要意义。目前,有相关报道研究树仔菜种子精油及脂肪酸成分,而关于树仔菜植株的化学成分的报道目前仍未见报道。本文分别采用溶剂浸泡法以及CO2超临界萃取法对海南树仔菜植株浸膏进行提取,使用气相-质谱联用仪(GC-MS)对浸膏化学成分进行分析,探讨其利用价值,以期为海南树仔菜的开发利用提供科学依据。 1 材料和方法 1.1 树仔菜植株阴干,中强 取海南树仔菜植株地上部分,包括茎、叶。样品于2010年6月采自海南省五指山市,经中国带农业科学院环境与植物保护研究所彭黎旭研究员鉴定。将树仔菜植株阴干,粉碎后备用。石油醚Ⅰ(沸点30~60℃),甲醇均为分析纯。 仪器:SFE-T超临界流体萃取系统(美国超临界萃取公司);Trace DSQⅡ气相-质谱联用仪(数据处理软件为Xcalibur,美国Thermo公司)。 1.2 测试方法 1.2.1 植株浸膏粗提物的制备 称取树仔菜植株粉末100g置于三角瓶中,分3次加入2 000 m L石油醚Ⅰ萃取,过滤取石油醚相合并后减压蒸干得到植株浸膏粗提物。分3次加入甲醇50 m L,溶解弃去甲醇相去除粗提物中的非油性成分,得到石油醚提取植株棕色浸膏1.3125 g。 1.2.2 树仔菜超氧化物的制备 称取树仔菜粉末50 g,在萃取压力为37 MPa、萃取温度为43℃、萃取时间为165 min、夹带剂甲醇的体积为3 m L,得到树仔菜超临界CO2萃取物。分3次加入100 m L石油醚Ⅰ进行分离,取石油醚相减压蒸干,得到CO2超临界萃取植株黄色浸膏0.1176 g。 1.2.3 仪器和质谱条件 采用GC-MS测定树仔菜浸膏的化学成分,浸膏样品经丙酮与正己烷混合液溶解后上机测定。GC条件:色谱柱:DB-5毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25μm);载气:He,1.0 m L/min;进样口温度:250℃;进样方式:不分流进样,进样量为1μL;程序升温:起始温度60℃,保持0.3 min,以30℃/min升温至240℃,保持6 min,以50℃/min升温至280℃,保持30min。MS条件:EI源,电子能量:70 e V;接口温度:280℃;离子源温度:220℃;质谱采集延迟时间:3.5 min;质谱扫描范围:60~600 amu。 质谱分析:对GC-MS分析得到的总离子色谱图各色谱峰相应质谱图经计算机谱库(NIST08)检索定性鉴别,并人工解析各峰相应的质谱图,采用面积归一化法计算各成分相对质量分数。 2 浸膏成分检测 本试验研究了海南树仔菜石油醚浸泡萃取和超临界CO2萃取两种方法得到树仔菜浸膏化学成分,采用石油醚室温浸提浸膏得率为0.75%,CO2超临界萃取浸膏得率为0.28%(表1)。利用石油醚浸提得到的浸膏成分共检出33种化合物,鉴定出的18种化合物占总离子流出峰面积的90.28%;CO2超临界萃取得到的浸膏成分共检出29种化合物,鉴定出的17种化合物占总离子流出峰面积的92.94%。酯类、脂肪醇类和烷烃类是浸膏的主要成分。在石油醚浸提浸膏中,亚麻酸和棕榈酸酯类所占比例最高,共54.13%,其他包括二甲基金刚烷、叶绿醇等烷烃类和醇类等成分。在超临界萃取的浸膏产物中,亚麻酸、棕榈酸酯类(38.82%)和E,E,Z-1,3,12-十九碳三烯-5,14-二醇(17.23%)为主要成分,还有羊毛甾醇、二甲基金刚烷等。 3 树仔菜浸提液提取 树仔菜浸膏中主要成分为脂肪酸、脂肪醇类物质,其中亚麻酸甲酯、亚麻酸乙酯、棕榈酸甲酯所占比例最高,这与已有报道文献一致。考虑到亚麻酸属不饱和脂肪酸是构成人体脑细胞和组织细胞的重要成分,具有维持大脑和神经功能、调节血脂作用、预防心肌梗塞和脑梗塞、降低血黏度、增加血液携氧量、抵抗胰岛素和糖尿病、降血压等功效,因此树仔菜具有较高的作为保健食品的价值。 本试验分别采用石油醚浸泡萃取和超临界CO2萃取两种方法对树仔菜浸膏进行提取。在得油率方面石油醚浸泡萃取高于超临界CO2萃取,这主要是由于石油醚浸泡多次提取更完全。在提取物的主要成分方面,脂肪酸、脂肪醇类物质都可以通过石油醚浸泡萃取和超临界萃取两种方法进行提取,但是石油醚浸提浸膏中脂肪酸类物质比例较高,