单侧学习时大鼠小脑绒球内gabaa受体表达的变化.docxVIP

单侧学习时大鼠小脑绒球内gabaa受体表达的变化 一侧外耳信息的急性损失可能会导致眼动异常和姿势障碍。目前认为,这些症状是由于两侧前庭神经核神经元静息活动失衡造成的,并且,随着两侧前庭神经核神经元静息活动平衡的恢复,眼动异常和姿势障碍能够逐渐消失,这一过程被称为前庭代偿。有证据表明小脑绒球,特别是小脑绒球中的γ-氨基丁酸A(GABAA)受体很可能参与了前庭代偿过程中这一机制的发生。GABAA受体是由多种亚单位组装成的配体门控离子通道受体。其亚单位种类很多,包括α1～6、β1～4、γ1～4、δ、ρ1～3、θ、π,组合更是复杂。Nusser等发现在小脑颗粒细胞的树突及胞体膜有GABAA受体α1、α6、β2、 β3亚单位的表达。然而其他亚单位是否也在小脑绒球中表达以及与前庭代偿的关系如何,尚未见报道。为探明其与前庭代偿的关系,本研究应用免疫组化技术对GABAA受体α3、β1、δ在迷路切除前后大鼠小脑绒球中的表达进行了研究,以揭示这些亚单位表达的变化与前庭代偿的关系。 1 材料和方法 1.1 动物模型与组成 1.2 准备 1.3 免疫组织化学实验步骤 1.4 统计方法x：sxs 2 结果 2.1 行为观察 2.2 gabaa3亚单位免疫组化结果 2.3 gabaa1和亚单位免疫组化结果 3 绒球内神经递质和受体的调节作用 GABA是中枢神经系统主要抑制性神经递质,GABAA受体属于配体门控离子通道超家族,它通过门控跨膜通道的Cl-来介导脊椎动物中枢神经系统的快速抑制性神经传导。外周前庭系统损伤后,导致眼动和姿势障碍,这是由于破坏了前庭眼通路和前庭脊髓通路。在单侧迷路切除后,这些症状尤为明显,因为术侧和对侧前庭神经核间神经元的活性严重失衡。然而,随着时间的推移,许多症状在前庭代偿过程中逐渐消失,这一过程是在中枢神经系统的整合下完成的。在前庭代偿过程中,前庭神经内侧核中的神经元存在两种可塑性机制:其一,单侧迷路切除术后,损伤同侧前庭神经内侧核嘴侧区域的神经元内在兴奋性持续增加;其二,与神经元内在兴奋性改变的同时发生的γ-氨基丁酸受体功能效应在损伤侧的前庭神经内侧核神经元中迅速下调。目前已经发现,单侧迷路破坏术后可诱导前庭神经内侧核(medial vestibular nuclei,MVN) 区I组代谢性谷氨酸受体亚型mGluR1 减少。而小脑绒球前庭生理和病理过程中扮演着重要角色,在小脑绒球内可能也存在类似的调节方式。前庭小脑的切除或输入绒球的攀援纤维的断裂可以严重延迟代偿,代偿后绒球的切除又能引起已经恢复的行为缺陷再次出现(Courjon J,1982)。而且,前庭内侧核的嘴侧,有15%～20%的神经元是绒球目标神经元(FTNs),接受同侧绒球的单突触抑制(Sato Y,1988),这点也支持单侧迷路切除后前庭内侧核神经元接受绒球的神经冲动而使内源激动性增加。小脑绒球对到不同眼外肌前庭眼反射通路的兴奋和抑制支有特殊的抑制调节,绒球也是前庭神经核经苔状纤维输入的前庭传入信号和下橄榄核经苔状纤维输入的视觉信号汇聚的场所。因此,小脑绒球中的神经细胞很可能发生与前庭内侧核的神经元相关的但趋势不同的改变。Johnston等发现,在前庭代偿期间,切除损伤同侧的绒球可以阻止同侧前庭神经内侧核神经元代偿性的内在兴奋性增加,而切除对侧绒球却不能阻止,这也说明绒球对FTNs的作用严格限制在同侧。但绒球的切除并不能阻止GABA受体效能的下调,这提示前庭神经内侧核神经元对急性传入缺失的反应是并行的、分离的。 尽管有关研究不少,但有关绒球内神经递质和受体与其调节功能的研究不多。余其林等发现GABAA受体α1亚单位在小脑绒球中有表达,但迷路切除后在损伤同侧和对侧绒球中表达无差异。Horii等研究发现,迷路切除后50h在损伤同侧绒球内KA2mRNA的表达增加,损伤后6h对侧绒球mGluR1mRNA的表达下调,这可能会减少浦肯野细胞对同侧前庭神经元的抑制。此外,糖皮质激素受体、蛋白激酶K都可能参入这个机制。Horii等发现迷路切除后50h GAD65mRNA在双侧绒球的表达上调,这种上调一方面可能与浦肯野细胞对FTNs的抑制作用有关,因为从浦肯野细胞到FTNs的投射可能为GABA能神经的;另一方面可能与小脑皮质内浦肯野细胞上的GABAA受体有关,通过对浦肯野细胞的作用来调节浦肯野细胞对FTNs的抑制,促进双侧前庭神经核神经元静息电位的平衡。 本研究结果表明α3亚单位在小脑绒球基本不表达,在前庭代偿过程中也没有诱导出α3亚单位的表达,提示α3亚单位可能并非GABAA受体在小脑绒球主要的结构与功能亚单位。而单侧迷路切除后术侧绒球内GABAA受体β1、δ亚单位短期内增加,这与Horri等的结果一致,说明绒球内GABA系统在前庭代偿过程中效能发生改变的方式很可能是通过提高递