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谷胱甘肽还原酶活性的测定 一、目的要求 学习果蔬组织中谷胱甘肽还原酶活性的测定原理和方法。 二、基本原理 谷胱甘肽还原酶 （Glutathione reductase ，GR ）是一种黄素酶，每分子酶蛋 白含有一分子的黄素腺嘌呤二酸 （FAD ）。谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分 布，维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽 （GSH ）水平。还原型谷胱甘肽 （GSH ） 测 可使含巯基 （-SH ）的蛋白质或酶处于还原状态或活性状态，对于维持蛋白质或 酶的正常功能，维持细胞内较高的还原势具有很大意义。 检 在还原型辅酶Ⅱ （Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate [reduced form] ， NADPH ）提供氢的条件下，GR 能将氧化型谷胱甘肽 （GSSG ）还原成还原型谷 质 + 胱甘肽 （GSH ），同时，NADPH 形成NADP 。反应式如下：  GR  液NADH  H  GSSG NADP  2GSH NADPH 在波长340 nm 处有吸收峰，因此可以通过测定OD340 的减小来计算 谷胱甘肽还原酶的活性。 测 海 三、材料、仪器及试剂 （一）材料 上 各种水果和蔬菜 （如梨、马铃薯）。 检 （二）仪器及用具 研钵、高速冷冻离心机、移液器、离心管、试管、计时器、水浴锅、容量瓶 质 （100 mL 、200 mL、1 000 mL ）、紫外分光光度计。 （三）试剂 液 1．100 mmol/L、pH 7.5 的磷酸缓冲液 （含1 mmol/L EDTA ）， 母液A （200 mmol/L Na HPO 溶液）：称取35.61 g Na HPO ·2H O 或53.65 g 2 4 2 4 2 Na HPO ·7H O 或71.64 g Na HPO ·12H O ，用蒸馏水溶解，定容至1 000 mL 。 2 4 2 2 4 2 测 海 母液B （200 mmol/L NaH PO 溶液）：称取27.6 g NaH PO ·H O 或31.2 g 2 4 2 4 2 NaH PO ·2H O 用蒸馏水溶解，定容至1 000 mL 。 2 4 2 上 检 取84.0 mL 母液A 和16.0 mL 母液B 混合后，调节pH 至7.5，然后稀释至 200 mL ，即为100 mmol/L 、pH 7.5 磷酸缓冲液。 称取29.2 mg EDTA ，用100 mmol/L、pH 7.5 磷酸缓冲液溶解、定容至100 mL 质