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海南树仔菜对大鼠胚胎毒性及致畸性研究 著名学术：保宫木。别名:天绿香、减肥菜、五指山野菜,大戟科守宫木属植物,可人工种植,亦有野生。海南树仔菜为海南省人工种植,由于树仔菜的营养价值、保健功能及其独特的美味,多年来已被人们作为蔬菜食用。为了解海南省人工种植的树仔菜的致畸性,我们进行了传统致畸试验,结果如下。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 制成干法 采集海南省五指山地区种植的新鲜树仔菜,取可食部分70℃烘烤后制成干粉,1 g干粉约相当于10 g新鲜蔬菜。以树仔菜干粉作为受试物,实验时以蒸馏水将树仔菜干粉配制成2.5%、5%和10%混悬液供试验用。 1.1.2 中心提供生产许可证 SPF级SD大鼠,由广东省医学实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(粤)2003-0002号。实验动物使用许可证号:SYXK(琼)2005-0004。 1.2 方法 1.2.1 灌胃给予sd大鼠 选性成熟SD雌雄性大鼠,按1︰1同笼。每日早晨检查出阴栓者,当日作为受孕0 d,将孕鼠随机分成3个剂量组和阴性对照组(本实验室近期以阿斯匹林300 mg/kg灌胃给予SD大鼠,显示阳性结果:胎鼠出现露脑、脐疝,吸收胎及死胎发生率、胎鼠体重及体长、骨骼发育不全及畸形率与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P﹤0.01。所以该次试验不设阳性对照组)。于受孕的d 7~16,各剂量组灌胃给予250 mg/kg、500 mg/kg、1 000 mg/kg(高剂量组按最大使用浓度和最大灌胃容量)树仔菜干粉,阴性对照组灌胃给予蒸馏水,灌胃容量为10.0 ml/kg。 1.2.2 胎鼠骨内检查 于受孕的d 0、7、12、16、20称体重。d20断头处死孕鼠,剖腹取出子宫连胎称重,检查着床数、吸收胎数、死胎数、活胎数,称胎仔重、测量胎仔体长、尾长。将每窝1/2的活胎鼠制作骨骼标本,检查胎鼠骨胳发育情况;将每窝1/2的活胎鼠用Bouins液固定后进行内脏检查。 1.2.3 统计学处理 全部数据采用SPSS10.0软件包进行统计学处理。计量资料的数据以ue0af±s表示,并采用t检验或F检验。计数资料采用χ2检验。以P﹤0.05表示差异有统计学意义。 2 结果 2.1 影响大鼠体重的决定 各剂量组孕鼠体重及增重与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05),见表1。 2.2 计算2.24.337,p为0.133.2.4.4.4.4.4.4.4.4%的规则 经χ2检验,各组胎鼠存活率的差异无统计学意义(χ2=4.937,P=0.174),见表2。各剂量组胎鼠体重、体长、尾长与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05),见表3。 2.3 肢体骨畸形 各组均未见外观、内脏、头颅骨、肋骨及四肢骨畸形。各组均可见胸骨发育不全或缺失,经χ2检验,差异无统计学意义(χ2=3.048,P=0.384)。见表4。 3 树仔菜干法的急性毒性和致畸作用 关于树仔菜的食用安全性,众说纷纭。人群流行病学研究和动物实验报道的结果亦各不一致。1994~1995年间,台湾地区连续出现阻塞性细支气管炎病例,流行病学调查发现,可能与生吃守宫木(作为减肥蔬菜)有关,但毒性成分及其作用机制仍未阐明。2005年,郭巨先等人报道,该校蔬菜基地种植的守宫木干粉喂养大鼠30 d,饲料中守宫木干粉含量10%组动物出现了心、肺、肝、肾等毒性反应和死亡,并呈一定的剂量反应关系。至2005年,树仔菜在海南的种植规模已经很大,在人群中也已有多年食用的历史,但从未见食用后有中毒的报道。为了更系统地了解树仔菜的食用安全性,按照我国现行的对食品新资源进行毒理学安全性评价程序的规定,我们进行了急性毒性及遗传毒性试验。结果显示:树仔菜干粉对雄雌性小鼠经口MTD﹥10.0 g/kg体重,Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验及小鼠精子畸形试验结果均为阴性。用树仔菜干粉掺入饲料中喂养大鼠90 d,动物除摄食量减少,体重增加量减缓外,未见其他明显中毒症状及动物死亡。 孕妇食用树仔菜能否对下一代健康构成危害?鉴于其致畸作用很少报道。为了解树仔菜的致畸性,为生育期妇女食用安全提供实验依据,本实验室按《食品安全性毒理学评价程序与方法》进行了传统致畸试验。结果显示,在本实验室设计的剂量范围内,海南树仔菜对孕鼠的体重、胚胎形成和发育无不良影响,未见外观及内脏畸形,树仔菜干粉各剂量组的骨骼异常与对照组比较,差异无统计学意义。表明海南树仔菜无母体毒性、胚胎毒性和致畸性。